上海秉越電子儀器有限公司

一、微生物純培養技（jì）術（shù）
微生物在自（zì）然界中不僅分布廣，而且種類多，並多是（shì）混雜地生活在一（yī）起。要（yào）想研究或利用某一微生物，必須把混雜（zá）的微生物類群（qún）分離開來，以得到隻含一種微生物的（de）純培養（yǎng）。微生物學中將在實驗室條件下由一個細胞或一種細胞群繁殖得到的後代稱為微生物的純培養。
純（chún）培養技術包括（kuò）兩個基本步驟：① 從自然環境中分離培養對象。② 在以培（péi）養對象為（wéi）唯一生物種類的隔離（lí）環境中培養、增殖，獲得這一生物種類的（de）細（xì）胞群體。針對（duì）不同微生物（wù）的特點，有許多分離方法（fǎ）。應用最廣的是平板法分離純培養。
（一）、用固（gù）體培養基分（fèn）離純培養
單個微生物在適宜的（de）固體培養基表麵或內（nèi）部生（shēng）長（zhǎng）、繁殖到一（yī）定程（chéng）度可以形成肉眼（yǎn）可見的、有一定形態結構的子細（xì）胞生長群體，稱為菌（jun1）落（colony）。當固體培養基表麵眾多菌落連（lián）成一片時，便成為（wéi）菌苔（lawn）。不同微（wēi）生物在特定培養基上生長形成（chéng）的菌落或菌苔一般都具有穩定的特征，可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據。大多數細菌、酵母菌、以及（jí）許多真菌和（hé）單細（xì）胞藻類能在固體培養基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分（fèn）離法很容易得到純培養。所謂平板（bǎn），即培養平板（culture plate）的簡稱，它是指固體培養基倒入無菌平皿，冷卻凝固後（hòu），盛固體培養基的平皿。這方法包括將單個微生（shēng）物分離和固定在固體培養基表麵或裏麵。固體培養基用瓊脂或其它（tā）凝膠物（wù）質（zhì）固化（huà）的培養基，每個（gè）孤立的活（huó）微生物體生長、繁殖形成菌落，形成的菌落便於移植。最常（cháng）用的分離、培養微生（shēng）物的固體培養基是瓊脂固體培養基平板。這種由Kock建立的采用平板分離微生物純培養的技術簡便易行，100多年（nián）來一直是各種菌種分離的最常用手（shǒu）段。
1. 稀釋倒平板法（pour plate method）
先將待分離的材料（liào）用無菌水作一係列的稀釋（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然後分（fèn）別（bié）取（qǔ）不同（tóng）稀釋（shì）液少許，與已熔化並冷（lěng）卻至50℃左右（yòu）的瓊脂培養（yǎng）基混（hún）合，搖勻後（hòu），傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保（bǎo）溫（wēn）培養一定時間即可出現菌落。如果稀釋得當，在平板表麵或瓊脂培養基中就可出現（xiàn）分（fèn）散的單個菌（jun1）落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重複以上操作數次，便可得到純培養。　
2. 塗布平板法（spread plate method）
由於將含菌材料先加到還較燙的培養基中再倒平（píng）板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且采用稀釋倒平（píng）板法也會使一些嚴格（gé）好氧菌因被固定在瓊脂中（zhōng）間缺（quē）乏氧氣而影響其生長，因此在（zài）微生物學研究中更常用的純種分離方法是塗布平板法。其做法是先將已熔（róng）化的培（péi）養（yǎng）基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量（liàng）的某一稀釋（shì）度的樣（yàng）品懸液滴加（jiā）在平板表（biǎo）麵（miàn），再用無菌玻璃塗（tú）棒（bàng）將菌液均勻分散至整個平板表麵，經培養後挑取單個菌落（圖2-4）。
3. 平板劃線法（fǎ）（streak plate method）
用接種環以無菌操作沾取（qǔ）少許待分離的材料，在無菌平板表麵進行平行劃（huá）線（xiàn）、扇（shàn）形劃線（xiàn）或其他形式的連續劃線，微（wēi）生物細胞數量將隨著劃（huá）線次數的增加而減（jiǎn）少，並逐步分散（sàn）開來，如果劃（huá）線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表（biǎo）麵得到單菌（jun1）落。
4. 稀釋搖管法（dilution shake culture method）
用固體培養基分離嚴格厭（yàn）氧菌（jun1）有它（tā）特殊的地方。如果（guǒ）該微生物暴露於空氣中不立即死亡，可以采用通常的（de）方法製備平板，然後置放在封閉（bì）的容器中（zhōng）培養，容器中的氧氣可采用化學、物理或生物的方法清除。對於那些對氧氣更為敏感的（de）厭氧性微生物，純培養（yǎng）的（de）分離則可采用稀釋搖管培養法進（jìn）行，它是（shì）稀釋倒平板法的一種變通形式。先將一係列盛無菌（jun1）瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保（bǎo）持在（zài）50℃左右（yòu），將待（dài）分離的材料用這些試管進（jìn）行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝（níng）後，在（zài）瓊（qióng）脂柱表麵傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間（jiān）。進行單菌落的挑取和移植，需先（xiān）用一隻滅菌針將液體（tǐ）石蠟--石蠟蓋取（qǔ）出，再（zài）用一隻毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無（wú）氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在（zài）培養皿中，用無菌刀將瓊（qióng）脂（zhī）柱（zhù）切成薄片進（jìn）行觀察和菌落的移（yí）植（zhí）。
（二）、用液體培養基分離純培養
對於大多數細菌和真菌，用平板法分離通常是（shì）滿意（yì）的，因為（wéi）它們的大多數種類在固體培養基（jī）上長得很好。然而迄（qì）今為止並不是所有的微生物都能在固體培（péi）養（yǎng）基上生長，例如一些細胞大的細菌、許多（duō）原生動物和藻類等，這些微生物仍需要用液體培（péi）養基分離來（lái）獲得純培養。
通常采用的（de）液體培養（yǎng）基分離純化法是稀釋法。接種物在液體培養基中進（jìn）行順序稀釋，以（yǐ）得到高度稀釋的效果，使一支試管（guǎn）中分配不到一個微生物。如果（guǒ）經稀釋後的大多數試管中（zhōng）沒有微生物生長，那麽有微（wēi）生物生長的試管得到的培（péi）養物可能就是純培（péi）養物。如果經稀釋後的（de）試管中有微生（shēng）物生長的比例提（tí）高了（le），得到純培養物（wù）的機率就（jiù）會急劇下降。因此，采用稀釋法進行液體分離，必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數（一（yī）般（bān）應超過95%）表現為（wéi）不生長。

（三）、單（dān）細胞（孢（bāo）子）分離

稀釋法有一個重要缺點，它隻能分離出混雜微生物群體中占數量優勢的種類，而在自然界，很多微生物在混（hún）雜群體中都是少（shǎo）數。這時，可以采取顯（xiǎn）微分（fèn）離法從混雜群體中直（zhí）接分（fèn）離單個細胞（bāo）或單（dān）個個體進行培養以獲得純培養，稱為單細胞（或單（dān）孢子）分離法。單細胞分離法的難度與細胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原（yuán）生動物（wù）較容易，個體很（hěn）小的（de）細菌則較難。
對於較大的（de）微生物，可采用毛細管提取（qǔ）單個個體，並在大量的滅菌培養基中轉移（yí）清洗幾次，除去較小微生物的汙染。這項操作可在低倍顯微鏡，如解剖顯微鏡下進行。對於個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行。目前，市場上有售的顯微操作儀種（zhǒng）類很多，一般是通過機械、空氣或油壓傳動裝置來（lái）減小手的動作幅度，在顯微鏡（jìng）下用毛（máo）細管或顯微針、鉤、環等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培（péi）養。在沒（méi）有顯微操作儀時（shí），也可（kě）采用一些變通的（de）方法在顯（xiǎn）微鏡下進行單細胞分離，例如將（jiāng）經適當（dāng）稀釋後（hòu）的樣品製備成小液（yè）滴在（zài）顯微鏡下觀察，選取隻含一個細胞的液體來進行純培養物（wù）的分離。單細胞分離法（fǎ）對操作技術有比較高的要求，多限於高度專業化的科學研究中采用（yòng）。

（四）、選擇培養分離

沒（méi）有一種培（péi）養基或一種培養條件能夠滿（mǎn）足自然界中一切生物生長的要求，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。在一種培養基上接種多種微生物，隻有（yǒu）能生長的才生長，其它被抑製。如果某種微生物的生長需（xū）要是已知的，也可以（yǐ）設（shè）計一套（tào）特定環境（jìng）使之特別適合這種微（wēi）生物的生長，因而能（néng）夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生（shēng）物選擇培養出來，盡（jìn）管在混雜的微生物群體中這種微生物可能隻占少數。這種通過選擇培養進行微生物純培養分離的技術（shù）稱為選擇培養分離，是十（shí）分重要的，特別（bié）對於從自然界中分離、尋（xún）找有用的微生物。在自然（rán）界中，除了極特殊的情（qíng）況外，在大多數場合下微生（shēng）物群（qún）落是由多種微生物組成的，因此，要（yào）從中（zhōng）分離出所需（xū）的特定微生物是十分困難的，尤其當某一種微生物（wù）所存在的數量與其它微生物相比非常少時，單采用一般的平板稀釋（shì）方法幾乎是不可能分離到該種微生物的（de）。例如，若某處的土壤中的微生物數量在10^８時，必須稀釋到10^-6才有可能在平板上分離到單菌落，而如果所需的微生物的（de）數（shù）量僅為10^２-３，顯然不可能在一（yī）般通用的（de）平板上得到該微生（shēng）物的單菌落。要分（fèn）離這種微生物，必須根據該微生物的特點，包括營養、生理（lǐ）、生長條（tiáo）件等，采用選擇培（péi）養分離的方法。或（huò）抑製使大多數微（wēi）生物不能生長（zhǎng），或造成有利於該（gāi）菌生長的環境，經過一定時間培養後使該菌在群落中的數量上升，再通過平板稀釋等方法（fǎ）對它進行純培養分離。
1. 利用（yòng）選擇（zé）平板進行（háng）直接分離
主要根據待分離微生物的特點選擇不同的培養條（tiáo）件，有多種方法可以采用。例如在從土壤中（zhōng）篩選蛋白酶產生菌時，可以在培養基中添（tiān）加（jiā）牛奶或酪素製備培養（yǎng）基（jī）平（píng）板，微生物（wù）生長時若產生蛋白（bái）酶則會水解牛奶或酪素，在平板（bǎn）上形（xíng）成透明的蛋白質水解圈。通過菌株（zhū）培養時產生的（de）蛋白質水解圈對產酶菌株進行篩選，可以減少工作量，將那些大量（liàng）的（de）非產蛋白酶菌（jun1）株淘汰；再（zài）如，要分離高溫（wēn）菌，可在高溫條件進行培養；要分離某（mǒu）種抗菌素（sù）抗性菌株，可在加（jiā）有抗菌素的平（píng）板上進行分離；有（yǒu）些微（wēi）生（shēng）物（wù）如螺旋體、粘細菌、藍細（xì）菌等能在瓊脂平板表麵（miàn）或裏麵（miàn）滑行，可以利用它們的滑動特點進行分離純化，因為滑行能使它們自己和其它不能移動的微生物分開。可將微生（shēng）物群落點種到平板上，讓微生物滑行，從滑行前沿（yán）挑（tiāo）取接種物接種，反複進行，得（dé）到純培養物。
2. 富集培養
主（zhǔ）要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同（tóng），製定特定的環境條件，使僅適（shì）應於該條件的微生（shēng）物旺盛生長，從而使其在群落中的數量大（dà）大（dà）增加，人們能夠更容易地從自然界中（zhōng）分離到所需的特定（dìng）微（wēi）生物。富集條件可根據所需分離的微生物的特點（diǎn）從物理、化學（xué）、生物（wù）、及綜合多個（gè）方麵進（jìn）行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養等等許多方麵。如采用富集方法從土壤中（zhōng）分（fèn）離能降解酚類化（huà）合物對羥基苯甲酸的微生物的實驗過程。首先（xiān）配製以（yǐ）對羥基苯甲酸為唯一（yī）碳源的液體培養（yǎng）基並（bìng）分（fèn）裝於燒瓶中，滅菌後（hòu）將（jiāng）少量的土壤樣品接（jiē）種於（yú）該液體培養基中，培養一定時間，原來透明的培養液會變（biàn）得渾濁，說明已有大量微生物生長。取少量上述培（péi）養液轉移至（zhì）新鮮培（péi）養液中重新培養（yǎng），該過程經數次（cì）重複後能利用對（duì）羥基（jī）苯甲酸的（de）微生物的比例在培養物（wù）中將大大提（tí）高，將培養液（yè）塗布於以對羥基苯甲酸為唯一碳源（yuán）的瓊脂平板，得到的微生物菌落中的大部分都是能降解對羥基苯甲酸的微生物。挑取一部分單菌落分別接種（zhǒng）到含有及缺乏對羥基苯甲酸的液體培（péi）養基中進行培養，其中大部分在含有對羥基苯甲酸（suān）的培養基中生長，而（ér）在沒有對羥基苯甲酸的培養基（jī）中表現為（wéi）沒有生長，說明通過該富集程序的（de）確得到了欲分離的目標微（wēi）生（shēng）物。通過（guò）富集培養使原本在自然環境中占少數的微生物（wù）的數量大大提高後，可以再通過稀釋倒（dǎo）平板或平板劃線等（děng）操（cāo）作得到純培養物。
富集培養是微生物學家最強（qiáng）有力的技術手段之一。營養和生理條件的幾乎無窮盡的組合形（xíng）式（shì）可應用於從自然界選擇出（chū）特定微生物的需要。富集培養方法（fǎ）提供了按照意（yì）願從自（zì）然界分（fèn）離出特定已知微生物種類的有力手段，隻要掌握這種微生物的特殊要求就行。富集培養法也可用來分（fèn）離培養出由科學家設計的特定環境中能（néng）生長的微生物，盡管（guǎn）羞羞视频网站並不知道什麽微生物能在這種特（tè）定的環（huán）境中生長。
（五）、二元培養物
分離的目（mù）的通常（cháng）是要得到（dào）純培養。然而，在有些情況下這是做不（bú）到的或是很難（nán）作到的。但可用二元培養物（wù）作為純化培養的替（tì）代物。隻有一種微生物的培養物稱為純培養物，含有二種以上微（wēi）生物的培養物稱為（wéi）混合培養物，而如果培養物中隻含有二種（zhǒng）微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關係的（de）培養（yǎng）物稱為二（èr）元培養物。例如二元培養物（wù）是保存（cún）病毒的最有效途徑，因為病毒是細胞生物的嚴格的細胞（bāo）內寄生物。有一些具有細胞的（de）微生物也是嚴格的其它生物（wù）的細胞內寄（jì）生物，或（huò）特殊的共生（shēng）關（guān）係（xì）。對於這些生物，二元培養物是在實驗室控製條件下可能達到的（de）最接近於（yú）純培（péi）養的培養方法。
在自然（rán）環境中，獵食細小微（wēi）生物的原生動物也（yě）很（hěn）容易用（yòng）二元培養（yǎng）法在實驗室（shì）培（péi）養，培養物由原生動物（wù）和它獵（liè）食的微生物二者組成。例如，纖毛蟲、變形（xíng）蟲和粘菌。對這些（xiē）生物，二者的關係可能並不是嚴格的。這些生物（wù）中有些能夠純培養（yǎng），但是其（qí）營（yíng）養要求往往極（jí）端（duān）複雜，製備純培養的培養基很困難、很費（fèi）事。
二（èr）、微生物生長（zhǎng）量的測定
微生物學研究中常常要進行微生物生長量的測（cè）定，有多種方法用（yòng）於微生（shēng）物生（shēng）長量的測定，概括起來常用（yòng）的有以下幾種：
（一）直接計（jì）數法（fǎ） ( 又稱（chēng）全數法（fǎ） )
1 、計（jì）數器直接測（cè）數法
取定量稀釋的單細（xì）胞培養物懸液放置在血（xuè）球計數（shù）板 ( 細胞個體形態較大的單細胞微生物，如酵母（mǔ）菌等 ) 或細菌計數板 ( 適用於（yú）細胞個體形態較小的細菌 ) 上，在顯微鏡下計數一定體積中的平均細胞（bāo）數，換算出（chū）供測樣品（pǐn）的（de）細胞數。
（ 1 ）血球計數板及細胞計數
血球計數板是一種在特定平麵上劃有格（gé）子的特殊載片。在劃有格子的區域中，有分別用雙線和單線分隔而成的方格。其中有以雙（shuāng）線為界劃成（chéng）的方（fāng）格 25( 或 16) 格，這種以雙線為界的格子稱為中格，其（qí）內有以單線為界的 16 （或 25 ）小格。因此，用（yòng）於細胞計數（shù）的區（qū）域的總小格數為：25×16 = 400 。該 400 個小格排成一正方（fāng）形的（de）大（dà）方格，此大方格的（de）每條邊的邊長為 1 mm ，故 400 個小格的總麵積為 1mm^２。
在進行細胞計數前，先取蓋玻片（piàn）蓋於計數方格（gé）之上，蓋玻片的下平麵與刻有方格的血球計數板平麵之間留有0.1mm 高度的空隙。含有細胞的供測樣品（pǐn）液被加注（zhù）在此空隙中。加注在 400 個小格（ 1mm^２ ）之上與蓋玻片之間的空隙中的液體（tǐ）總（zǒng）體積應為：1.0mm×1.0mm×0.1mm = 0 . 1mm^３
一般表（biǎo）示樣品細胞濃度的單位為：億個 / mL 。因此（cǐ），在計數後，獲得在 400 個（gè）小格中的細胞總（zǒng）數，再乘以 10 ^４ ，以換算成每 mL 所含細胞數。其計算公式如（rú）下：
菌液的含菌數 /mL = 每小格平均菌數× 400 × 10 000 ×稀釋倍數
在進行具體（tǐ）操作時，一（yī）般取五個中格（gé）進行計數，取格的方（fāng）法一般有兩種：① 取計數板斜角線相連的（de） 5 個中格；② 取（qǔ）計數板 4 個角上（shàng）的 4 個中格和計（jì）數板正中央的 1 個中（zhōng）格。對橫跨位於（yú）方（fāng）格邊線上的細胞，在計數時，隻計一個方格 4 條邊中的 2 條邊線上的細胞，而另兩條邊線上的細（xì）胞則不計；取邊的原則是（shì）每個方格均取上邊線與右邊線或下邊線與左邊線。

圖 3 — 5 血（xuè）球計數板方格示意圖
（ 2 ）細菌計數板及細胞計數
細菌計數板與血球計數板（bǎn）結構大同小異（yì），隻（zhī）是刻有格子的計數板平麵與蓋玻片之間的空隙高度僅0.02mm 。因此，計算方法稍有差異（見以下計算公式），餘（yú）者與血球計數板法（fǎ）同。
菌液樣本的含菌數 /mL = 每小（xiǎo）格平（píng）均菌數× 400 × 50 000 ×稀釋倍數
2 、塗片染色計數
用計數板附帶的 0.01mL 吸管，吸取（qǔ）定量稀釋的（de）細菌懸液，放置刻有 1 cm ^２ 麵積的玻片上，使菌液均勻地塗布在 1cm ^２麵積上，固定後染色，在顯微鏡下任意選擇幾個乃至（zhì）十幾個視野（yě）來計算細胞數（shù）量。根據計算出的視野（yě）麵積核算出每 1cm ^２中的菌數，然後按 1cm ^２麵積上的菌液量和稀釋度，計算每 mL 原液中的含菌數。
原菌液的（de）含菌數 /mL = 視野中的平（píng）均菌數× 1cm^２/ 視野麵積× 100 ×稀釋倍（bèi）數
3 、比濁法
這是測定菌懸液中細胞（bāo）數量的快速方（fāng）法。其原理是菌懸液中（zhōng）的單細胞微生物，其（qí）細胞（bāo）濃度與混濁度成正比，與透光度成反比。細胞越多，濁度越大，透光量（liàng）越少。因此，測定菌懸液的光密度 ( 或透光度 ) 或濁度可以反映細胞的濃度。將未知細胞數的懸液與（yǔ）已知（zhī）細胞（bāo）數的菌懸液（yè）相比，求出未知菌懸液所含的細胞數。濁（zhuó）度計、分光光度儀是測定菌懸液細胞濃度的常用儀器。此法比較簡便，但使用有局限性。菌懸液顏色不宜太深，不（bú）能混雜其他物（wù）質，否則不能獲得正確結果。一般在用此法測定細（xì）胞濃度時，應先用（yòng）計數（shù）法作對（duì）應計數，取（qǔ）得經驗數據，並製作菌數（shù）對 OD 值的標準曲線方便查獲菌數值。
（二）活菌計數法 ( 又叫間接計數法 )
活菌計數法又稱間接計數法 。直（zhí）接計數法測定到的是死、活細胞總數，而間接計（jì）數法測得的僅是活菌數。這類方法所得的數（shù）值往（wǎng）往比直接計數法測（cè）得的數值小。
1 、平板菌落計數
此法是基於每一個分（fèn）散的活細胞（bāo）在適宜的培養基中具有生長繁殖並能形成一個菌落的能力；因此，菌落數就是待測（cè）樣（yàng）品所含的活菌數。
將（jiāng）單細胞微生物待測液經 10 倍係列稀釋後，將一定濃度的（de）稀釋液定量地接種到瓊脂平板培養基上培養，長出的菌落（luò）數就是稀釋液（yè）中含（hán）有的活細胞數，可以計算出（chū）供測（cè）樣品中的（de）活細胞數。但應注意，由於各種原因，平板上的單個菌落可能並不（bú）是由一個菌體細胞形成的，因此在表達單（dān）位樣品含菌數時，可（kě）用單位樣（yàng）品中形成菌落單位來表示，即 CFU ／ mL 或 CFU ／ g(CFU 即 colony-forming unit) 。
2 、液體稀釋最大或然數法測數
取定量（ 1mL ）的單細（xì）胞（bāo）微生物懸液，用培養液（yè）作定量 10 倍係列稀釋，重複 3－5 次，將不同稀釋度的係列稀釋管置適宜溫度下培（péi）養。在稀釋度合適的前提下，在菌濃度相對較高的稀釋管內均出現菌生長，而自某個稀釋度較高的稀釋管開（kāi）始（shǐ）至稀（xī）釋度更高的稀釋管（guǎn）中均不出現菌生長，按稀釋度自低到高的順序，把最後（hòu）三個稀釋（shì）度相對較高的、出現菌生長的稀釋管之稀釋度稱為臨（lín）界級數。由 3 至 5 次重複的連（lián）續三級臨界級數獲得指數，查相應（yīng）重複的最大或然數 ( 即 most probable number ， MPN) 表求得（dé）最大可能數，再乘以出現生長的臨界級數的最低稀釋（shì）度，即可（kě）測得（dé）比較可靠的（de）樣品活菌濃度。
在實踐中，通常（cháng）以5管（guǎn）重複（fù）為一個組，故這裏僅列出5次重複（fù）測數統計表。隻要知道了數量指標（biāo），就可查知近似值。
3 薄膜過濾計數法（fǎ）
測定水與空氣中的活菌數量（liàng）時，由（yóu）於（yú）含菌濃度低，則使用微生物限度檢測儀可（kě）先將待測樣（yàng）品 ( 一定體積的水或空氣（qì） ) 通過微孔（kǒng）薄膜 ( 如硝化纖維薄膜 ) 過濾濃縮，然後（hòu）把（bǎ）濾膜放在適當的固（gù）體培養基上培養，長出菌落後即可計數。
（三）細胞物質量測定法
1 、幹重法
集菌儀（yí）過濾定量培養物（wù）用離心或過濾的方（fāng）法將菌體（tǐ）從培養基中分離出來，洗淨、經（jīng）常壓或真空幹燥，幹燥溫度常采用（yòng）105℃、100℃或紅（hóng）外線烘幹至恒重，也可在較低溫度（80℃或40℃）下真空幹燥，然後精確稱重，即可計算出培養物的（de）總生物量。過濾時絲狀真菌用濾紙過濾 ，細菌用醋酸纖維膜等進行（háng）過濾。一般細菌幹重約為濕重的 20 ％ ～ 25 ％。此法直接（jiē）而（ér）又可靠，但要（yào）求測定時菌體濃度較高，樣品（pǐn）中不含非（fēi）菌體的幹物（wù）質。
2 、含氮量測定法
細胞的蛋白質含量（liàng）是（shì）比較穩（wěn）定的，可以從（cóng）蛋白（bái）質含量的測定求出（chū）細胞物質量。已（yǐ）知細菌細胞幹重的含氮量一般為12%～15％，酵母菌為7.5％，黴菌為6.0％。一般細菌的含氮量約為原生質幹重的 14 ％。而總氮量與細（xì）胞蛋白質總含量的關係可用下式計算：
蛋白質總量 = 含氮量百分比× 6.25
3 、DNA 測定法（fǎ）
這種（zhǒng）方法是基於 DNA 與 DABA — 2HCl( 即新配製的 20 ％ W ／ W ， 3,5 —二氨基苯甲酸 - 鹽酸（suān）溶液 ) 結合能顯示特殊熒（yíng）光反應的原理，定量測定培養物的菌（jun1）懸液的熒光反應強（qiáng）度，求得 DNA 的含量，可以（yǐ）直接反（fǎn）映所含細胞物質（zhì）的量。同時還可根（gēn）據 DNA 含量計算出細菌的數量。每個細（xì）菌平均含（hán） 8.4 × 10 ^－５ng DNA 。
4 、其他生理指標測定法
微生（shēng）物新（xīn）陳代謝的結果（guǒ），必然要（yào）消耗或產（chǎn）生一定（dìng）量的物質。因此也可（kě）以用某物質的消耗量（liàng）或某產物的形成量來表示微生物的生長量。例如（rú）通過測定微生物對氧的吸收、發酵糖產酸量或 CO_２的（de）釋放（fàng）量，均可用來作為生長指標。使用這一方法時，必（bì）須注意作為生長指（zhǐ）標的那些生理活動，應不受外界其他因素的影響或幹擾（rǎo），以便獲得準確的結果。
從上表中可以看（kàn）出，每種方法都各有優點和局限性。隻有在考慮了這些因素同需要著手解決的問題之間的關係以（yǐ）後，才能對具體的方法進行選擇。正如前麵說過的，平皿菌落計（jì）數法是微生物學中應用最多的常規方法，掌握這一方法的原理和實際操作，很有必要。此法在理論上能反映（yìng）活菌數。另外當用兩（liǎng）種不同的方法測量細菌的生（shēng）長量時，其結果（guǒ）不（bú）一致是完全可能的。
測定微生物的生長量，在理論和實（shí）踐上都十分重要。當羞羞视频网站要對細（xì）菌在不同培養基中（zhōng）或不同條（tiáo）件下的生長情（qíng）況進行評價或解釋（shì）時，就必須（xū）用數量來表示它的生長。例如可以通過細（xì）菌（jun1）生長（zhǎng）的快慢來判（pàn）斷某一條件是否適合。生長（zhǎng）快的細胞，最終的總收獲量可能沒有另一些條件下的收獲量大。在另一些條件下，生長速率雖然較低，但它卻可在一段時間內不斷增加。因此，隻有具備了有關生（shēng）長的定量知識，才（cái）能在實際應用中作（zuò）出正確的選擇，以利於科（kē）研和生產活動的進一步開（kāi）展。