上海秉越電子儀器有限公司

1.有機物中的（de）胺根（gēn）在強熱和CuSO4，濃H2SO4作用（yòng）下，硝化生成（NH4）2SO4
反應式為
2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器（qì）中與堿作用，通（tōng）過蒸餾（liú）釋放出NH3，收集於H3BO3溶液中
反應式為:
（NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO4
2NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O
3.用已知濃度（dù）的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據HCI消（xiāo）耗的量（liàng）計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既（jì）得蛋白質的含量點焊機（jī）
反應式為：
（NH4）2B4O7 H2SO4 5H2O＝（NH4）2SO4 4H3BO3（NH4）2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3

凱氏定氮儀操作步驟：（一）消（xiāo）化1、準備6個凱氏（shì）燒瓶，標號。1、2、3號燒瓶中分別加入適當（dāng）濃度的蛋白溶液1.0mL，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上（shàng）。再依次加入硫（liú）酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g，濃硫酸2.0mL，30%過氧化（huà）氫1.0mL。4、5、6號（hào）燒瓶作為空白對照，用以（yǐ）測定試（shì）劑中可能含有的微量含氮物質，對樣（yàng）品測（cè）定（dìng）進（jìn）行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液，其餘（yú）所加（jiā）試劑與1、2、3號燒瓶相同。2、將加好（hǎo）試（shì）劑的各（gè）燒瓶（píng）放（fàng）置消化架上，接好抽（chōu）氣（qì）裝置。先用微火加熱煮沸，此時燒瓶（píng）內物質（zhì）炭（tàn）化變（biàn）黑，並（bìng）產生大量泡沫（mò），務必注意（yì）防止氣泡衝出管口（kǒu）。待泡沫消失停止產生後，加大（dà）火力，保持瓶內液體微沸，至溶液澄清後，再繼續加熱（rè）使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時轉動燒瓶，以使內壁粘著物質均能流入底部，以保證樣品完全消化。消化時放出的氣體內含SO2，具有強烈刺（cì）激性，因此自始自終應打開抽水（shuǐ）泵將氣體抽入自來水排出。整個消化過程均應在通風櫥中進行。消化（huà）完全後，關閉火焰，使燒瓶冷卻（què）至室溫。（二）蒸（zhēng）餾和吸收蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的。

凱（kǎi）氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣（qì）發生、氨的蒸餾（liú）和（hé）氨的吸收三部分組成（chéng）。

1、儀器的洗滌儀器安裝前（qián），各部件需（xū）經一般方法洗滌幹淨，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液（yè）中，煮約10min，水洗（xǐ）、水（shuǐ）煮10min，再水洗數次，然後安裝並固定在（zài）一隻鐵架台上。儀器使用前（qián），微（wēi）量（liàng）全（quán）部管道都須經水（shuǐ）蒸氣洗滌，以除去管道內可能殘留的氨，正在使用的儀器（qì），每次測樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器，重複蒸氣洗滌，不得少於三（sān）次，並檢查儀（yí）器是否正常。仔細檢查各個連接處（chù），保證不漏氣。首先在蒸氣發生（shēng）器中加（jiā）約2/3體積蒸餾水（shuǐ），加入數滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，並放入少（shǎo）許沸石（或毛細管等），以防爆（bào）沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經插管流入反應室，但玻杯內的水不要放光，塞上棒狀玻（bō）塞，保（bǎo）持水封（fēng），防止漏氣。蒸氣發生後，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣隻能進入反應室，導致（zhì）反應室內的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應室上端（duān）口通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶（píng）接收冷凝水。從定氮（dàn）球發燙開始計時，連續蒸煮5min，然後移開煤氣燈。衝洗完畢，夾緊蒸氣發生（shēng）器與收集器之間的連接橡膠管，由於氣體冷卻壓力降低，反應室內廢液自（zì）動抽到（dào）反應室外殼（ké）中，打開廢液排出口夾（jiá）子放出廢液。如此清洗2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼（péng）酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝（níng）管下（xià）口完全浸沒在溶液中，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內部已洗幹淨。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水衝洗（xǐ）冷凝器下口，關閉（bì）煤氣燈，儀器即可供（gòng）測（cè）樣品（pǐn）使用。

2、無機氮（dàn）標準樣品的（de）蒸餾吸收（shōu）由於定氮操作繁瑣，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術（shù），初學者宜先用（yòng）無機氮標準樣品進行反複（fù）練習，再進行有機氮未知樣品的測定。常用巳知濃度的標準硫酸銨測（cè）試三次。取潔淨的100mL錐形瓶五隻，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲（jiǎ）基藍（lán）-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴，蓋好瓶口待用。取其中一隻錐形（xíng）瓶承接在冷凝管下端，並使冷凝管的出口浸（jìn）沒在（zài）溶（róng）液中。注意：在此操（cāo）作之前（qián）必須先打開收集器活塞，以免錐形瓶內液體倒吸。準確吸取2mL硫酸銨標（biāo）準液加到玻杯中，小心提起棒狀（zhuàng）玻塞使硫酸銨溶液（yè）慢慢流入蒸餾瓶（píng）中，用少量蒸餾水衝洗小玻杯（bēi）3次，一並放人蒸餾（liú）瓶中。然後用量筒向小玻杯中加入（rù）10 mL 30%NaOH溶液，使堿液慢慢流入蒸餾瓶中，在堿液尚未完全流入時，將（jiāng）棒狀玻塞（sāi）蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸餾水（shuǐ），再慢慢打開玻（bō）塞，使一（yī）半水流入蒸餾瓶，一半留在小玻杯中作水封（fēng）。關閉收集器活塞（sāi），加熱蒸氣發生器，進行蒸餾。錐形瓶中的硼酸（suān）-指示劑混合液由於吸收了氨，由紫紅色（sè）變成綠色。自變色時起，再蒸餾3～5min，移動錐形瓶使瓶內液麵離（lí）開冷凝管下口約lcm，並用少量（liàng）蒸餾水衝洗（xǐ）冷凝（níng）管下口，再繼續（xù）蒸餾1min，移開錐形瓶，蓋好，準（zhǔn）備滴定。在一次蒸餾（liú）完（wán）畢後，移去煤氣（qì）燈，夾（jiá）緊蒸氣發生器與收集器間的橡膠管（guǎn），排除反應完畢（bì）的廢液，用水衝洗小玻杯幾次，並（bìng）將廢液排（pái）除。如此反複衝（chōng）洗幹淨後，即可進行下一個樣品的蒸餾。按（àn）以上方法用（yòng）標準硫酸銨再做兩次。另取2mL蒸餾水代（dài）替標準硫酸銨進行空白測定二次。將各（gè）次蒸餾的錐形瓶一起滴定（dìng）。

3、未知樣品及空白的蒸（zhēng）餾吸收將消化（huà）好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾（liú）吸收。加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到（dào）反（fǎn）應室中（zhōng），再用熱蒸餾水洗（xǐ）滌小玻（bō）杯3次（cì），每次用水量（liàng）約3mL，洗滌液一並倒（dǎo）入反應室（shì）內。其餘（yú）操作按標準硫酸銨的蒸餾進行。由於消化液內硫酸鉀濃度高而（ér）呈粘稠狀，不易從凱（kǎi）氏燒瓶內倒出，必（bì）須加入熱蒸餾水5 mL稀釋之，如果有結晶析出，必須微熱溶解，趁熱加入玻（bō）杯，使其流入反（fǎn）應室。此外，還應當注意趁儀器洗滌尚未完全冷（lěng）卻時立即加入樣品或空白對照液（yè），否則消化液通過冷（lěng）卻的管道容易析出結晶，造成堵塞。（三（sān））凱氏（shì）定氮儀滴定樣品和空白蒸餾完畢後，一起進行滴定。打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管（guǎn）以0.0100mol/L的標準鹽（yán）酸溶液進行滴定。待滴至瓶內溶液呈暗灰色時，用蒸餾水將錐形瓶（píng）內壁四周淋（lín）洗一次。若振搖後複現綠色（sè），應再小心滴入標準鹽酸溶液半（bàn）滴，振搖觀察瓶內溶液顏色變化，暗灰色在一二（èr）分鍾內不變，當視為到達滴（dī）定終點。若呈粉（fěn）紅色，表明已超越滴定終點，可在已（yǐ）滴定耗用的標準鹽酸溶液用量（liàng）中減去0.02mL，每組樣品的定氮終點顏色（sè）必須完全一致。空白（bái）對照液接（jiē）受瓶內的溶液顏色不變或略有變化尚未出現綠色，可以不（bú）滴定。記錄每次滴定耗（hào）用（yòng）標準鹽酸溶（róng）液（yè）毫升（shēng）數，供計算用。