上海秉（bǐng）越電子儀（yí）器（qì）有限公司

一、微生物純培養技術
微生物在自然（rán）界中（zhōng）不僅分布廣，而（ér）且種類（lèi）多，並（bìng）多是（shì）混雜（zá）地生活在一起。要（yào）想（xiǎng）研究或利（lì）用（yòng）某（mǒu）一微生物，必須把混雜的微生物類（lèi）群分離開來，以得到隻含一種微生物的純培（péi）養。微生物學中將在實驗室條件下由一個細胞或一種細胞群繁殖得到的後代稱為微生（shēng）物的純培養。
純培養技術包括兩個基本步驟：① 從自然環（huán）境中分離培養（yǎng）對象。② 在以培（péi）養對象為唯一生物種類的隔（gé）離環境中培養、增殖，獲得（dé）這一生物種類的細（xì）胞群體。針對不同微生物的特點，有許多分離（lí）方法。應用最廣的是平板法分（fèn）離純培養。
（一）、用固體培養基分離純培養
單個微（wēi）生物在（zài）適宜的固體培養基表麵或內部生長、繁殖到一（yī）定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞生長群體，稱為菌落（colony）。當固體培養基表麵（miàn）眾多菌落連（lián）成一片時，便成為菌苔（lawn）。不同微生物在特定培養基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩定的特征，可以成為對（duì）該微生物進行（háng）分類、鑒定的重（chóng）要依據。大多數細菌、酵母菌、以及許多真菌和單（dān）細胞藻（zǎo）類能在固體培養（yǎng）基上形成（chéng）孤立的菌落，采（cǎi）用適宜的平板分離法很容易得到純培養。所謂平（píng）板，即培養平板（culture plate）的簡稱，它是指固體培養基倒入無菌平皿，冷卻凝固後，盛固體培養基的平皿。這方法包括將單個微生物分離和固定在固體培養基（jī）表（biǎo）麵或裏麵。固體培養（yǎng）基用瓊脂或（huò）其（qí）它凝膠物質（zhì）固化的培（péi）養基，每個孤立的活微生物（wù）體生長、繁（fán）殖形成菌落，形成的（de）菌落便於移植。最（zuì）常用的分離（lí）、培養微生物的固體培養基是瓊脂（zhī）固體培養基平板。這種（zhǒng）由Kock建立的采用（yòng）平板分離微（wēi）生物純培養的技術簡便易行，100多年來一直是各（gè）種（zhǒng）菌種分離的最常用手段。
1. 稀釋倒平（píng）板法（pour plate method）
先將待分離的材料用無（wú）菌水作一係列的稀（xī）釋（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然後（hòu）分（fèn）別取不同（tóng）稀（xī）釋液少許，與已熔化並（bìng）冷卻至50℃左右的（de）瓊脂培養（yǎng）基混（hún）合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含（hán）菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間（jiān）即可出現菌落（luò）。如果稀釋得當，在平板表（biǎo）麵或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重複以上操作數次，便可得到純培養。　
2. 塗布平板（bǎn）法（spread plate method）
由（yóu）於將含菌材（cái）料先加到還較燙的培養基（jī）中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且采用稀釋倒（dǎo）平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定（dìng）在瓊脂中間缺乏氧氣（qì）而影（yǐng）響其生（shēng）長，因此在微生（shēng）物學研究中更常用的（de）純種分離方法是塗布平板法。其做法是先（xiān）將已熔化的培養基倒（dǎo）入無菌平皿，製（zhì）成無菌平板，冷卻凝固後（hòu），將一定量（liàng）的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表麵，再用無菌玻（bō）璃塗棒將菌液均勻分（fèn）散至整個平板表麵（miàn），經培養（yǎng）後挑取單個菌落（圖2-4）。
3. 平板劃（huá）線法（streak plate method）
用接種環以無菌操作沾取少許待分離（lí）的材料，在無菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步（bù）分散開來，如果劃線適宜（yí）的話，微生物能一一分（fèn）散，經培養後，可在平板表麵得到單菌（jun1）落（luò）。
4. 稀釋搖管（guǎn）法（dilution shake culture method）
用固體培（péi）養基分離嚴格厭氧菌有它特殊的地方。如果該微生物暴露於空氣中不立（lì）即死亡，可以（yǐ）采用通（tōng）常的方法製備平板，然後置放在封閉的（de）容器中培養，容（róng）器中的氧氣可（kě）采用化（huà）學、物理或生物（wù）的方法清除。對於那些對氧（yǎng）氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可采用稀釋（shì）搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。先將（jiāng）一係列盛無菌瓊脂培（péi）養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進（jìn）行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在（zài）瓊脂（zhī）柱表麵（miàn）傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混（hún）合物，將培養基和空氣（qì）隔開。培養後（hòu），菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟（là）--石（shí）蠟蓋取出，再用一隻毛細管（guǎn）插入瓊脂和管壁之間，吹入（rù）無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置（zhì）放在培養皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。
（二）、用液體培養基分離純培養（yǎng）
對於大多數細菌和（hé）真菌，用平（píng）板法分離通常是滿意的，因為它們（men）的（de）大多數種類在固體培養基上長得（dé）很好。然而迄今為止並不是所有的微生物都能在固體培養基上生長，例如一些細胞大（dà）的細菌、許多原生（shēng）動（dòng）物和（hé）藻類等，這些微生物仍需（xū）要用液體培養基分離來獲得純培養。
通常采用的液體培養基分離純化法是稀釋法。接種物在液（yè）體培養基中進行（háng）順序稀釋，以得到高度稀釋的效果，使一支（zhī）試管中分配不（bú）到一個微生物。如果經稀釋後的大多數試管中沒有微生物生長，那麽有微生物生長的（de）試管得到的培養物可能就是純培養物。如果經稀釋後的試管中（zhōng）有微生物生長的比例提（tí）高了，得到（dào）純培養物的機率就（jiù）會（huì）急（jí）劇下（xià）降。因此，采用（yòng）稀釋法進行液體分（fèn）離，必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數（一般應超過95%）表現為不生長。

（三）、單細胞（孢子）分（fèn）離

稀釋法有一個重要缺點（diǎn），它隻能（néng）分離出混雜（zá）微生物群體中占數量優勢的種類，而在自然（rán）界，很多微生（shēng）物在混雜群體中都（dōu）是少數。這時，可以采取顯微分離法從（cóng）混雜群體（tǐ）中（zhōng）直接分離單個細胞或單（dān）個個（gè）體進行培（péi）養以獲得純培養，稱為（wéi）單細胞（或單孢子）分離法。單細胞分離法的難度與細（xì）胞（bāo）或個體的大小成反比，較大的微生物（wù）如藻類、原生動物（wù）較容易，個體很小的細菌則（zé）較難。
對於較大的微生物，可采用毛細管（guǎn）提取單個個體，並在大量的滅菌培養基中轉移清洗幾次，除去較小微生物的汙染。這項（xiàng）操作可在低倍顯微鏡，如（rú）解剖顯微鏡下進行。對於個體（tǐ）相對較小的微（wēi）生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行。目前，市場（chǎng）上（shàng）有售的顯（xiǎn）微操作儀種類很多，一般是通過機械、空氣或油壓傳動裝（zhuāng）置來減小手的動作（zuò）幅度，在顯微鏡下用毛細管或顯（xiǎn）微針（zhēn）、鉤、環等挑取單個微生物細（xì）胞或孢子以獲得純培養。在沒有顯微操（cāo）作儀時，也（yě）可采用一些變通的方法在顯微鏡下進（jìn）行單細（xì）胞分離，例如將經適當稀（xī）釋（shì）後的樣品製備成小液滴在顯微鏡（jìng）下（xià）觀察（chá），選取隻含一個細胞的液體來進（jìn）行純培養物的分離。單細胞分離法對操（cāo）作技術有比較高的要求，多限於（yú）高度專業化的科學研究中采用。

（四）、選擇（zé）培養分離

沒有一種培養基或（huò）一種培養（yǎng）條件能夠滿足自然界中一切生物生長的（de）要求，在（zài）一定程度上所有的培養基都是選擇性的。在（zài）一種培養基上接種多種微生物，隻有能生長的才生長（zhǎng），其它被抑製。如果某（mǒu）種（zhǒng）微生物的生長需要是（shì）已知的，也可以設計一套特定（dìng）環境使之特別適合這種微生物的生（shēng）長，因而（ér）能夠從自然界混雜的微生物（wù）群體中把這種微生物選擇（zé）培養（yǎng）出來，盡管在混雜的微生（shēng）物群體中這種微生物可能隻占少數。這種通過選（xuǎn）擇培養進行微生物純培養分離的技術稱為選擇培養分離，是十分重（chóng）要的，特（tè）別對於從自然界中分離、尋找有用的微生物。在自然界中，除了極特殊的情況外（wài），在大多數場合下微生物群落是由多種微生物（wù）組成的，因此，要從中分離出所需的特定微生物是十分困（kùn）難的，尤其當某一種微生物所存在（zài）的數量與其它微（wēi）生物相比（bǐ）非常少時，單采用一般的平板稀釋方法幾乎是不可能分離到該種微生（shēng）物（wù）的。例如（rú），若某處的土壤中的（de）微生物（wù）數量在10^８時，必（bì）須（xū）稀釋到10^-6才有（yǒu）可能（néng）在平板上分離到單菌落，而如（rú）果所需的微生物的數量僅為（wéi）10^２-３，顯（xiǎn）然不可能在一般通用的平板上得到該微生物的單菌（jun1）落。要分離這種微生物，必須根據該微生物的特點，包括營養、生理、生長條件等，采用選擇（zé）培養分離的方法。或抑製使（shǐ）大多數微生物（wù）不能生長，或造成有利於該菌生（shēng）長的環境，經過一定時間培養後使該菌在群落中的數量上升，再通過（guò）平板稀釋等方法對它進行純培養分離。
1. 利用（yòng）選擇平板進行直接分離
主要根據待分離微生物的特點選擇不同的培養條件，有多種方（fāng）法可以采用。例如在從土壤中篩選蛋白酶產生菌時，可以在培養基中添加牛奶或酪（lào）素製備培養基平板，微生物生長時若產生蛋（dàn）白酶則會水解牛奶或酪素，在平板上形成（chéng）透明的蛋（dàn）白質水解圈（quān）。通過菌株培養時產生的蛋白質水解圈對（duì）產酶菌株進行篩選，可以（yǐ）減少工作量，將那些（xiē）大量的非產蛋白酶菌株淘汰；再如（rú），要分（fèn）離高溫（wēn）菌，可在高溫（wēn）條件（jiàn）進行培養；要分離某種抗菌素抗性菌株，可在加有抗菌（jun1）素的平板上進行分離；有些微生物如螺旋體、粘細菌、藍細菌等能在瓊脂（zhī）平板表麵或（huò）裏麵滑行，可（kě）以利用它們的滑動（dòng）特點進行分離純化（huà），因為滑行能使它們自己和其它不能（néng）移動的微生物分（fèn）開。可將微生物群落點種到平板上，讓微生物滑行，從滑行前沿挑取接種物接種（zhǒng），反複進行，得到（dào）純培養物。
2. 富集培養
主要是指利用不同微生物（wù）間生命活動特點的不同，製（zhì）定特定的環境條件，使僅適應於該條件的微生物旺盛生長（zhǎng），從而使其（qí）在群落中的數量（liàng）大大增加，人們能（néng）夠更容易地從自然界中分離（lí）到所需的特定微生物。富集條件可（kě）根據（jù）所需分離（lí）的微生物的特（tè）點從物理（lǐ）、化學（xué）、生物、及綜合多個方麵進行選（xuǎn）擇（zé），如溫度、pH、紫外線（xiàn）、高壓、光照、氧氣、營養等等許多方麵。如采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化（huà）合物對（duì）羥基苯甲酸的微生物的實驗過程。首先（xiān）配製以對羥基苯甲酸為唯（wéi）一碳源的液體培養基並分裝於燒瓶中，滅菌後將少量的土壤樣品接種於該液體（tǐ）培養基中，培（péi）養一定時（shí）間，原來（lái）透明的培養（yǎng）液會變得渾濁，說明已有大量微生物生長。取少量上述培養液轉移至新鮮培養（yǎng）液（yè）中重新培養，該過程經數次重複後能利（lì）用對羥（qiǎng）基苯甲（jiǎ）酸的微生物的比例在培養物中將（jiāng）大大提高，將培養液塗布於以對羥基苯（běn）甲酸為唯（wéi）一碳源的瓊脂平板，得到的（de）微生物（wù）菌落中的大部分都是能降解對羥（qiǎng）基（jī）苯甲酸的微生物。挑取（qǔ）一（yī）部分單菌落分別接種到含有及缺乏對羥基苯（běn）甲（jiǎ）酸的液體培養基中進行培養，其中大部分在含有（yǒu）對羥基苯（běn）甲（jiǎ）酸的培養基中生長，而在沒有對羥基苯甲酸的（de）培養基中表現為（wéi）沒有生長，說明通過該富集程序的確得到了（le）欲分離的目標微生物。通過富集培養使原本在自然（rán）環境中占（zhàn）少數的微生物的數量大大提高（gāo）後，可（kě）以再通過稀釋倒平板或平板劃線等操作（zuò）得到純培養物。
富（fù）集培養（yǎng）是微生物學家最強有力的技術手段之一。營養和（hé）生理條件的幾乎無窮盡的組合形式可應用於從自然界選擇出（chū）特定（dìng）微生物的（de）需要。富集培養方法提（tí）供了按（àn）照意願從自然界分離出特定已知微生物種類的有力手（shǒu）段，隻要掌握這種微生物的特殊要求就行。富集培養法也（yě）可用來分離培養出由科學家設計的特定環境中能生（shēng）長的微生物，盡管羞羞视频网站並不知道什麽微生物能在這種特定的環境中生長。
（五）、二元培養物
分離的目的通常是要得到純培（péi）養。然而，在有些情況下這是做不到的或是很難作（zuò）到的。但可用二元培養物作為純化培養的替代（dài）物。隻有一（yī）種微生物的培養物稱為純培養物（wù），含有二種以上微生物的培養物稱為混合（hé）培（péi）養物，而如果培養（yǎng）物中隻含有二（èr）種微生（shēng）物，而且是有意識的保持二者之間的特定關係的培（péi）養物稱為二元培養（yǎng）物。例（lì）如二元培養物（wù）是保存病毒的最有效途徑，因為病毒是細胞生物的嚴格的細胞內寄生物。有一些具有細胞的微生（shēng）物也是嚴格的其它（tā）生物（wù）的細胞內寄生物，或特殊的共生關係。對於這些生物，二元（yuán）培養物（wù）是在實驗室控製條件下可能達到的最接近於純培養的培養方法。
在自然環境中，獵食細小微生物的原生（shēng）動（dòng）物（wù）也很容易用二元培養法在實驗室（shì）培養，培（péi）養物由原生動物和它獵食的（de）微生物二者組成。例如，纖毛蟲、變形（xíng）蟲（chóng）和粘菌。對（duì）這些（xiē）生物（wù），二者的關係（xì）可能並不是嚴格（gé）的。這些生物中有些能夠純培養，但是其（qí）營養要求往往極端複雜，製備純培養的培養基很困難、很費事。
二、微生物生長量的測定
微生物學研究中常常要進行微生物生長量的（de）測定，有多種方法用於微生物生長量的測定，概括起（qǐ）來常用的有以下幾種：
（一）直（zhí）接計數法 ( 又稱全數法 )
1 、計數器直（zhí）接測數法
取定（dìng）量稀釋的單細胞培養物懸液（yè）放置在血球計數板 ( 細胞個體形態較大的單細胞微生物，如酵母菌等 ) 或細菌計數板 ( 適用（yòng）於細胞個（gè）體（tǐ）形態較小的細菌 ) 上，在顯微鏡（jìng）下計（jì）數一定體積中的平均細胞數，換算出（chū）供測（cè）樣品的細胞數。
（ 1 ）血球計數板及細（xì）胞計數
血球計數板是一（yī）種在特定平麵上劃有格子的特殊載片。在劃有（yǒu）格子的區域中，有分別用雙線和單（dān）線分隔而成的方格。其中有以雙線為界劃成（chéng）的方格 25( 或 16) 格，這（zhè）種以雙線為（wéi）界的格子稱為中格（gé），其內有以（yǐ）單線為界的 16 （或 25 ）小格。因此，用於細胞計數的區域的（de）總小格數為：25×16 = 400 。該 400 個小格排成一正方形的大方格，此大方格的（de）每條邊的邊長（zhǎng）為（wéi） 1 mm ，故 400 個小格的總麵積為 1mm^２。
在進行（háng）細胞計數前，先取蓋玻片蓋於計數方格之上，蓋玻片的下平麵與刻（kè）有方格（gé）的血球計數板平麵之間留有0.1mm 高度的空隙。含有細胞的供測樣品液被加注在此空隙中。加注在 400 個小格（ 1mm^２ ）之上與（yǔ）蓋（gài）玻片之間的空隙中的液體總體積應為：1.0mm×1.0mm×0.1mm = 0 . 1mm^３
一般表示樣品細胞濃（nóng）度的單位為：億個 / mL 。因此，在計數後，獲得在 400 個小格中（zhōng）的細胞總（zǒng）數，再乘（chéng）以 10 ^４ ，以換算成每 mL 所含細（xì）胞數。其計算公式如下：
菌液的含菌數 /mL = 每小格平（píng）均菌數× 400 × 10 000 ×稀釋（shì）倍數
在（zài）進行具體操作時，一般（bān）取（qǔ）五個中格進行計數，取格的方法一般有兩種（zhǒng）：① 取計數板斜角線相（xiàng）連的 5 個中格；② 取（qǔ）計數板 4 個角上的（de） 4 個中格和計數板正中央（yāng）的 1 個中格。對橫跨位於方格邊（biān）線上的細胞，在計數時，隻計一個（gè）方格 4 條（tiáo）邊中的 2 條邊線上的（de）細胞，而另兩條邊線（xiàn）上的細胞則（zé）不計；取邊的原則是每個方格均（jun1）取上邊線（xiàn）與右邊線或下邊線與左邊線（xiàn）。

圖 3 — 5 血球計（jì）數板方格示意圖
（ 2 ）細菌計數板及細胞計數
細菌計數板與（yǔ）血球計（jì）數板結構（gòu）大同小異，隻是刻（kè）有格子的計數板平麵與蓋玻片之間的空隙（xì）高度僅0.02mm 。因此（cǐ），計算方法稍有差異（見以下計算公式），餘者與血球計數板法同。
菌液樣本的含菌數 /mL = 每小（xiǎo）格平均菌數× 400 × 50 000 ×稀釋倍數
2 、塗片染色計數
用計數板附帶的 0.01mL 吸管，吸取定量稀釋的細菌懸液，放置刻有 1 cm ^２ 麵（miàn）積的玻片上，使菌（jun1）液均（jun1）勻地塗布在 1cm ^２麵積上，固定（dìng）後染色（sè），在顯微鏡下任意選擇幾個乃至十（shí）幾（jǐ）個視野來計算細胞數量。根據計算出的視野（yě）麵（miàn）積核算出每 1cm ^２中（zhōng）的菌數，然後按 1cm ^２麵積上的菌（jun1）液（yè）量和稀（xī）釋度，計算每 mL 原液中的含菌數。
原菌液的含菌數 /mL = 視野中的平均菌數× 1cm^２/ 視野麵積× 100 ×稀釋倍數
3 、比濁法
這是測定菌懸液中細胞數量的快速方法。其原理是菌懸液中的單細胞微生物，其細胞濃度與（yǔ）混濁度成正比，與透光度成（chéng）反比（bǐ）。細（xì）胞越多，濁度（dù）越大，透光量越少。因此，測定菌懸液的光密度 ( 或透光（guāng）度 ) 或濁度可以反映細胞的濃度。將未知細胞數（shù）的懸液與已知細胞數的（de）菌懸液相比，求出未知菌懸液所含的細胞數。濁度計、分光光度儀是測定菌懸液細胞濃度的常用儀器。此（cǐ）法比較簡便，但使用有局限（xiàn）性。菌懸液顏（yán）色不宜太深，不能混雜其他物質，否則不能獲得正確結果。一般在用此法測定細胞濃度時，應先用計數法作對應計數，取得經驗數據，並製（zhì）作菌數對 OD 值的標準曲線方便查獲菌數值。
（二）活（huó）菌計數法 ( 又叫間接計數法 )
活菌計數法又稱間接計數法 。直接計數法測定到的是死、活細胞（bāo）總數，而間接計數法測得的僅是活菌數。這類方法所得的數值往（wǎng）往比（bǐ）直接（jiē）計數（shù）法測得的數值小。
1 、平板菌落計（jì）數
此法是基於每一個分散的活細胞在適宜的培養基中具有生長繁殖並能形成一個菌落的能力；因此，菌落數就是待測樣品所含的活菌數。
將單細（xì）胞微生物待測液經 10 倍係列稀釋後，將一定濃度的稀（xī）釋液（yè）定量地接種（zhǒng）到瓊脂平板培養基上培養，長出的菌落數就是（shì）稀釋液中含有的活細胞數，可以（yǐ）計算出供測樣（yàng）品中的活細胞數。但應（yīng）注意（yì），由（yóu）於各種原因，平板上的單個菌落可能並（bìng）不是由一個菌體細胞形成的，因此在（zài）表達單位樣品含菌數時，可用單位樣品（pǐn）中（zhōng）形（xíng）成菌落單位（wèi）來表示，即 CFU ／ mL 或 CFU ／ g(CFU 即 colony-forming unit) 。
2 、液體稀釋最大或（huò）然數法測數
取（qǔ）定量（liàng）（ 1mL ）的單細胞微生物懸液，用培養液作定量 10 倍係列稀釋，重（chóng）複 3－5 次，將不同稀釋度的係列稀釋（shì）管（guǎn）置適宜溫度下培養。在稀（xī）釋度合適的前（qián）提下，在（zài）菌濃度相對較高的（de）稀釋管內均出（chū）現菌生長，而自某個稀釋度較高的稀釋管開始至稀釋度更（gèng）高的稀釋（shì）管中均不出現菌生（shēng）長，按稀釋度自低到高的順序，把最後三個稀釋度相對較高的（de）、出（chū）現菌（jun1）生長的稀釋管（guǎn）之稀（xī）釋度稱（chēng）為臨界（jiè）級數。由（yóu） 3 至 5 次重複的連（lián）續三級臨界級數獲得指數，查（chá）相應重複的最大或然數 ( 即 most probable number ， MPN) 表求得（dé）最大可能數，再乘以出現生長的臨界（jiè）級數（shù）的最低稀釋度，即可測得比較可（kě）靠的（de）樣品活菌濃度（dù）。
在實踐中，通（tōng）常以5管重複為一個組，故這裏僅列出5次（cì）重（chóng）複測（cè）數統計表。隻要知道了數量指（zhǐ）標，就可查（chá）知近似值。
3 薄膜過濾計數法
測定水與空氣（qì）中的活菌數量時，由於含菌濃度低，則使用微生物限度檢測儀可先將待（dài）測樣品 ( 一定體積的水（shuǐ）或（huò）空氣 ) 通過（guò）微（wēi）孔薄膜 ( 如硝化纖維薄膜 ) 過濾濃縮，然後把濾膜（mó）放在適當的固體培養（yǎng）基上培養，長出菌落後即可計數。
（三）細胞物質量測定法
1 、幹重法
集菌儀過濾定量培養物用離心或過（guò）濾的方法將（jiāng）菌體從培養基中分離出來，洗淨、經常壓或真空幹燥，幹燥溫度常采用105℃、100℃或紅外線烘幹（gàn）至恒重，也可在較低溫度（80℃或（huò）40℃）下真空幹燥，然後精確稱重，即可計算出培養（yǎng）物（wù）的總生（shēng）物量。過濾時絲狀真菌（jun1）用（yòng）濾紙過濾 ，細菌（jun1）用醋酸纖維膜等（děng）進行過（guò）濾。一般細菌（jun1）幹重約（yuē）為濕重的 20 ％ ～ 25 ％。此法直接而又可靠，但要求測定時菌體濃度（dù）較高，樣（yàng）品中不含非菌體的幹（gàn）物質（zhì）。
2 、含氮量測定（dìng）法
細胞的蛋白質含量是比（bǐ）較穩定（dìng）的，可以從蛋白質含（hán）量的（de）測定求出細（xì）胞物質量。已知細菌細胞幹重的含氮量（liàng）一般為12%～15％，酵母菌為7.5％，黴菌（jun1）為6.0％。一般細菌的（de）含氮量約為原生質幹重的 14 ％。而總氮量與細胞蛋白質總含量的關係可用下（xià）式計算：
蛋白質總（zǒng）量 = 含氮量百分比× 6.25
3 、DNA 測定法
這種方法是基於 DNA 與 DABA — 2HCl( 即新（xīn）配製的 20 ％ W ／ W ， 3,5 —二氨基苯甲酸 - 鹽酸溶液 ) 結合能顯示特殊熒光反應（yīng）的（de）原理，定量測定培養物（wù）的菌懸液的熒光反應強度，求得 DNA 的含量，可以直接反映所（suǒ）含細胞物質的量。同時還（hái）可（kě）根據 DNA 含量（liàng）計算出細菌的數量。每個細（xì）菌平均含（hán） 8.4 × 10 ^－５ng DNA 。
4 、其他生理指標測定法
微生物新陳代謝的結果（guǒ），必然要消耗或產生（shēng）一定量（liàng）的物質。因此也（yě）可以（yǐ）用某物質的消耗量或某產物的形成量來表示微生物（wù）的生長量。例（lì）如通過測（cè）定微生物對氧的（de）吸收、發酵糖產酸量或 CO_２的釋放量，均可用（yòng）來（lái）作為生長指標。使用這一（yī）方法時，必須（xū）注（zhù）意作為生長指標的（de）那些生理活動，應（yīng）不受外界其他因素的影響或幹擾，以便獲得準確的結果。
從上表中（zhōng）可以看（kàn）出，每種方法都（dōu）各有優點（diǎn）和局限性。隻有在考慮了這些因素（sù）同需要著手解決的（de）問題之間的關係以後，才（cái）能（néng）對具體的方法（fǎ）進行選擇。正如前麵說過的，平皿菌落計數法是微生物學中應用最多的常（cháng）規方法，掌握這一方法的原理和實際操作，很有必要。此法在理論上能反映活菌數。另外當用兩種不同的方法測量細菌的生長量時，其結果不一致是完全可能的。
測定微生物（wù）的生長（zhǎng）量，在理論和實踐（jiàn）上都十分重要。當羞羞视频网站要（yào）對細菌在不（bú）同培（péi）養基中或不同條件下的生長情況進行評價或解釋時（shí），就必須用（yòng）數量來表示（shì）它的生長。例如（rú）可以通過細菌生長的快慢來判斷某一條件是否適合。生長快的細胞，最終的總收獲量可能沒有另一些條（tiáo）件下的收獲量大（dà）。在另一些條件下，生長速率雖然較低，但它卻可在一段時間內不斷增加。因此，隻有具備了（le）有關生長的定量知識（shí），才能在實際應用中（zhōng）作出正確的（de）選擇，以利於科研和生產活動的進一步開展（zhǎn）。